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NEUROPROTEÇÃO: PANEXINAS NA NEURODEGENERAÇÃO DE RETINA CAUSADA POR TRAUMA MECÂNICO
Última alteração: 2012-11-13
Resumo
Resumo: Por meio de métodos combinados, como PCR em temporeal, Western Blot e imuno-histoqumica, estudamos a expressãogênica e caracterização do padrão de panexinas (Panx) em modelo deneurodegeneração.O papel funcional destes canais foi analisado por meio daanálise de viabilidade celular (LDH) com bloqueadores de canais.Palavras-chave: Neurodegeneração, Neuroproteção, Panexina, Retina.
IntroduçãoAs Panxs formam canal não-juncional na membrana plasmática, possibilitandoo fluxo regulado, papéis no acoplamento elétrico/metabólico e na comunicaçãoem redes neuronais (DVORIANTCHIKOVA, 2006). Apesar da literatura sobreas Panxs em neurodegeneração, há carência em estudos sobre elas duranteo processo neurodegenerativo em retina e quais as medidas para atuar naneuroproteção.
ObjetivosPor meio de técnicas combinadas, tais como PCR, imnuo-histoquímica,Western Blot e ensaio de lactato desidrogenase (LDH), analisar a expressãofuncional de Panxs na retina em modelo de neurodegeneração que mimetizaos processos celulares e moleculares de um trauma mecânico.
MetodologiaA quantificação e caracterização da expressão gênica das Panxs foi feita porPCR em tempo real, Western Blot e imuno-histoquimica,além da analise daviabilidade celular por LDH. Foram utilizados ratos Wistar adultos, submetidosa lesões e divididos em três grupos (1,3 e 7 dias).
ResultadosA modulação da expressão gênica da Panx1 apresentou aumento nostranscritos de mRNA em 2 horas e 1 dia após lesão. Na retina controle acumulona camada de células ganglionares e plexiforme interna. Nas lesionadasperde intensidade nas camadas de fibras nervosas no foco da lesão, enquantona plexiforme externa aumenta. Já a Panx2 diminuiu os transcritos após 6horas e 3 dias, se padrão se diferencia com o avanço da neurodegeneração,predominando nas regiões da camada de processos. A viabilidade celular nasretinas tratadas com Probenecid (bloqueador dos canais de Panx1) foi menorapós 4 horas de tratamento ao contrário do período de 6 horas de incubação.Após o período de 8 horas não houve variação na resposta. Esses resultadosindicaram que possivelmente os canais possuem dinâmicas diferentes duranteo progresso de degeneração, mostrando que é crucial aplicar o tipo detratamento (bloquear ou ativar os canais) no período adequado de acordo como estágio neurodegenerativo que o tecido se encontra.
ConclusõesA presença, modulação e expressão das Panx1 e Panx2 no processo deneurodegeneração aparentam ter influência no desencadeamento do processo.A determinação correta de seus papéis permite, através da manipulação doscanais, a abertura de uma nova alternativa para a neuroproteção da retina.
ReferênciasDVORIANTCHIKOVA,G.;IVANOV,D.;PANCHIN,Y.;SHESTOPALOV,V.I.Expression of Pannexin Family of Proteins in the Retina. FEBS Lett, USA,v.580, p.2178-82, 2006.
IntroduçãoAs Panxs formam canal não-juncional na membrana plasmática, possibilitandoo fluxo regulado, papéis no acoplamento elétrico/metabólico e na comunicaçãoem redes neuronais (DVORIANTCHIKOVA, 2006). Apesar da literatura sobreas Panxs em neurodegeneração, há carência em estudos sobre elas duranteo processo neurodegenerativo em retina e quais as medidas para atuar naneuroproteção.
ObjetivosPor meio de técnicas combinadas, tais como PCR, imnuo-histoquímica,Western Blot e ensaio de lactato desidrogenase (LDH), analisar a expressãofuncional de Panxs na retina em modelo de neurodegeneração que mimetizaos processos celulares e moleculares de um trauma mecânico.
MetodologiaA quantificação e caracterização da expressão gênica das Panxs foi feita porPCR em tempo real, Western Blot e imuno-histoquimica,além da analise daviabilidade celular por LDH. Foram utilizados ratos Wistar adultos, submetidosa lesões e divididos em três grupos (1,3 e 7 dias).
ResultadosA modulação da expressão gênica da Panx1 apresentou aumento nostranscritos de mRNA em 2 horas e 1 dia após lesão. Na retina controle acumulona camada de células ganglionares e plexiforme interna. Nas lesionadasperde intensidade nas camadas de fibras nervosas no foco da lesão, enquantona plexiforme externa aumenta. Já a Panx2 diminuiu os transcritos após 6horas e 3 dias, se padrão se diferencia com o avanço da neurodegeneração,predominando nas regiões da camada de processos. A viabilidade celular nasretinas tratadas com Probenecid (bloqueador dos canais de Panx1) foi menorapós 4 horas de tratamento ao contrário do período de 6 horas de incubação.Após o período de 8 horas não houve variação na resposta. Esses resultadosindicaram que possivelmente os canais possuem dinâmicas diferentes duranteo progresso de degeneração, mostrando que é crucial aplicar o tipo detratamento (bloquear ou ativar os canais) no período adequado de acordo como estágio neurodegenerativo que o tecido se encontra.
ConclusõesA presença, modulação e expressão das Panx1 e Panx2 no processo deneurodegeneração aparentam ter influência no desencadeamento do processo.A determinação correta de seus papéis permite, através da manipulação doscanais, a abertura de uma nova alternativa para a neuroproteção da retina.
ReferênciasDVORIANTCHIKOVA,G.;IVANOV,D.;PANCHIN,Y.;SHESTOPALOV,V.I.Expression of Pannexin Family of Proteins in the Retina. FEBS Lett, USA,v.580, p.2178-82, 2006.