INTRODUÇÃO: O gene Mo25 foi primeiramente identificado no estágio inicial de clivagem da embriogênese de ratos e posteriormente foi demonstrado que a proteína MO25 está ligada à polarização das células e à divisão celular em organismos como Schizosaccharomyces pombe, Drosophila melanogaster e humanos. Dados do nosso grupo mostraram que plantas que superexpressam ABAP1 (ABAP1^SE), proteína que regula a replicação do DNA, apresentam a primeira divisão mitótica assimétrica dos gametófitos masculinos alterada. Este problema durante a gametogênese pode ter ocorrido devido a não polarização celular do gametófito. Curiosamente, um dos genes reprimidos em plantas ABAP1 ^SE foi um homólogo ao Mo25 (At2g03410). No entanto, nada se sabe sobre o padrão de expressão ou a função deste gene em plantas. 

OBJETIVOS: Analisar o perfil de expressão gênica de AtMo25 de Arabidopsis thaliana através da técnica de PCR em tempo real utilizando primers específicos e isolar a região promotora de AtMo25 para  clonar em um vetor fusionado com o gene repórter GUS e inseri-lo em plantas.

METODOLOGIA: Para o isolamento da região promotora de AtMo25, nós extraímos DNA genômico de A. thaliana, amplificamos por PCR usando primers específicos para a clonagem no vetor pDONR221 utilizando a tecnologia Gateway de clonagem. A transferência do promotor do gene AtMo25 para outro vetor (pKGWFS7) que contem os genes repórteres GUS e GFP foi feita através de uma reação denominada LR. Para análise dos perfis de expressão por PCR em tempo real, primeiramente realizamos experimentos para validar os primers desenhados para serem utilizados utilizando SYBR.

RESULTADOS E CONCLUSÃO: Conseguimos amplificar a região promotora do gene AtMo25, acrescida dos braços de recombinação Gateway, com a enzima de alta fidelidade Phusion. Foi possível também, neste projeto, clonar o promotor do gene AtMo25 nos vetores Gateway pDONR221 e pKGWFS7 (vetor binário de plantas que possui os genes repórteres GUS e GFP) e em Agrobacterium tumefaciens. Além disso, validamos os primers específicos para AtMo25 e seus homólogos para ser realizado em experimentos de PCR em tempo real utilizando SYBRGreen.