Introdução: O Citomegalovírus Humano (HCMV) é um agente viral de grande importância mundial, que ocasiona sérias doenças em indivíduos imunocomprometidos e recém-nascidos, podendo levar à morte. Estudos das funções de proteínas virais do HCMV durante o ciclo de replicação são essenciais para o entendimento da replicação e patogenia do vírus. Resultados anteriores demonstraram que a proteína pp28 do HCMV, codificada pela fase aberta de leitura (ORF) UL99 é um dos principais constituintes do tegumento do vírus e é essencial para a replicação viral, funcionando no processo de aquisição final do envelope viral no citoplasma de células infectadas. Em associação com outras proteínas a pp28 se acumula intracelularmente no local de aquisição do envelope final do vírus. Estudos com vírus mutantes demonstraram que somente a porção N-terminal da pp28, contendo os primeiros 60 aminoácidos, é essencial para a replicação viral e para a incorporação da pp28 em partículas virais. Estudos estruturais dessa proteína são escassos na literatura cientifica, e podem contribuir para um melhor entendimento da sua função. Objetivo: O presente trabalho objetivou analisar estruturalmente a pp28 a fim de correlacionar a estrutura da proteína com sua função biológica. Metodologia: Clonagem do ORF (open reading frame) UL99 codificador da proteína pp28 no vetor de expressão pET28a(+), expressão da proteína em bactéria e purificação para futuras análises estruturais. Resultados: A clonagem do gene UL99 no vetor pET28a(+) não foi possível e devido a este fato o gene UL99 codificador da proteína pp28 foi clonado no vetor de expressão pGTK, no qual a proteína pp28 foi fusionada a GST (glutathione S-transferase). A clonagem correta da pp28 neste plasmídeo foi confirmada por digestão com enzimas de restrição e para continuidade deste projeto será confirmada por sequenciamento para posterior expressão e purificação da proteína por cromatografia de afinidade. Conclusão: A clonagem do ORF UL99 foi efetuada com sucesso. No entanto após sequenciamento observou-se que o plasmídeo usado para clonagem não era o pET28a(+) como esperado. Como o plasmídeo foi doado não tivemos o controle da veracidade do mesmo. Portanto decidimos usar o plasmídeo pGTK. Em objetivos futuros, visa-se a expressão da proteína se em bactéria, purificação para futuras análises estruturais.

Apoio financeiro: UFABC- CAPES.