Última alteração: 2013-11-21
Resumo
Um estudo para a contagem de micro-organismos utilizando softwares de imagem e uma metodologia de inoculação foram desenvolvidos. O método de determinação das unidades formadoras de colônia (UFC) foi baseado na contagem dos pixels brancos obtidos da fotografia do crescimento microbiano.
Análises microbiológicas são importantes ferramentas para avaliar a qualidade de ambientes.
Métodos de análise de imagem vêm sendo utilizados para sobrepujar as desvantagens na quantificação de colônias pela contagem visual.
Este trabalho visa desenvolver uma metodologia para a quantificação de UFCs baseado em softwares de tratamento de imagem.
Para a inoculação no meio de cultura foram feitas diluições sucessivas em água peptonada na faixa 10-1 até 10-6 g L-1 em tubos de ensaio. Os mesmos são esterilizados em autoclave e um volume do inóculo é adicionado para o meio de cultura. Movimentos suaves homogeneíza a solução e esta é vertida sobre placa Rodac estéril e incubada em estufa. As imagens digitalizadas foram processadas nos softwares Image Tool 3.0 e Corel Paint Shop Pro X2.
A homogeneização é um fator crítico para a análise, se não houver uma mistura adequada do meio com o inoculo os micro-organismos se proliferam desuniformemente. O processo de homogeneização foi aperfeiçoado desenvolvendo-se uma Técnica de Inoculação em Tubo (TIT). As vantagens do método foram a rápida velocidade de preparação, o crescimento uniforme das colônias e o menor tempo de incubação. Os resultados obtidos na contagem das UFCs estão apresentados na Tabela 1.
Tabela 1: Comparação entre os método de contagem manual e semi-automatizado.
CONTAGEM DE UFC
DILUIÇÃO
MANUAL
SEMI-AUTOMATIZADA
10-6
8
15
10-5
25
64
10-4
70
169
10-3
I
267
10-2
I
252
10-1
I
488
I = incontável.
A melhor opção para a contagem usando softwares foi transformar a imagem das placas Rodac em 2 bits. Na média um conjunto de 11 pixels brancos correspondeu a uma UFC. Os resultados se mostraram satisfatórios, porém necessita-se de mais estudos para contornarem-se as divergências.
Os estudos mostraram que o método de contagem através de softwares de imagem é dependente de diversos fatores. UFCs sobrepostas conduzem a falsos resultados. Isto nos leva a concluir que muitas das medidas microbianas divulgadas pelos laboratórios não são tão confiáveis como se imagina.