Sistema de Submissão de Resumos, III ENCONTRO DE INICIAÇÃO CIENTÍFICA - 2013 (ENCERRADO)

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ESTUDO EXPLORATÓRIO PARA O DESENVOLVIMENTO DE UMA METODOLOGIA PARA CONTAGEM DE MESÓFILOS, BOLORES E LEVEDURAS UTILIZANDO TRATAMENTO DE IMAGEM
Sandra E. Kitahara, Cristiane M. de Souza Sobrinho, Julio Cesar B. Fernandes

Última alteração: 2013-11-21

Resumo


Um estudo para a contagem de micro-organismos utilizando softwares de imagem e uma  metodologia de inoculação foram desenvolvidos. O método de determinação das unidades formadoras de colônia (UFC) foi baseado na contagem dos pixels brancos obtidos da fotografia do crescimento microbiano.

Análises microbiológicas são importantes ferramentas para avaliar a qualidade de ambientes.

Métodos de análise de imagem vêm sendo utilizados para sobrepujar as desvantagens na quantificação de colônias pela contagem visual.

Este trabalho visa desenvolver uma metodologia para a quantificação de UFCs baseado em softwares de tratamento de imagem.

Para a inoculação no meio de cultura foram feitas diluições sucessivas em água peptonada na faixa 10-1 até 10-6 g L-1 em tubos de ensaio. Os mesmos são esterilizados em autoclave e um volume do inóculo é adicionado para o meio de cultura. Movimentos suaves homogeneíza a solução e esta é vertida sobre placa Rodac estéril e incubada em estufa. As imagens digitalizadas foram processadas nos softwares Image Tool 3.0 e  Corel Paint Shop Pro X2.

A homogeneização é um fator crítico para a análise, se não houver uma mistura adequada do meio com o inoculo os micro-organismos se proliferam desuniformemente. O processo de homogeneização foi aperfeiçoado desenvolvendo-se uma Técnica de Inoculação em Tubo (TIT). As vantagens do método foram a rápida velocidade de preparação, o crescimento  uniforme das colônias e o menor tempo de incubação. Os resultados obtidos na contagem das UFCs estão apresentados na Tabela 1.

 

Tabela 1: Comparação entre os método de contagem manual e  semi-automatizado.

 

CONTAGEM DE UFC

DILUIÇÃO

MANUAL

SEMI-AUTOMATIZADA

10-6

8

15

10-5

25

64

10-4

70

169

10-3

I

267

10-2

I

252

10-1

I

488

I = incontável.

 

A melhor opção para a contagem usando softwares foi transformar a imagem das placas Rodac em 2 bits. Na média um conjunto de 11 pixels brancos correspondeu a uma UFC. Os resultados se mostraram satisfatórios, porém necessita-se de mais estudos para contornarem-se as divergências.

Os estudos mostraram que o método de contagem através de softwares de imagem é dependente de diversos fatores. UFCs sobrepostas conduzem a falsos resultados. Isto nos leva a concluir que muitas das medidas microbianas divulgadas pelos laboratórios não são tão confiáveis como se imagina.