A Engenharia de Tecidos inclui a proposta de reparação tecidual por meio de biomateriais: materiais utilizados em aplicações biomédicas com a finalidade de regenerar tecidos ou restaurar suas funções. Para verificar a viabilidade dos biomateriais, deve-se considerar o seu desempenho biológico, ou seja, a interação deles com o organismo, incluindo as propriedades relativas à biofuncionalidade e à biocompatibilidade. Os testes de biocompatibilidade se iniciam com testes de citotoxicidade. No entanto, apesar das condições de ensaio para os testes de citotoxicidade serem regulamentadas, alguns estudos apresentam dados divergentes em relação à citotoxicidade de biomateriais. As condições de preparo das amostras e as condições de ensaio podem interferir diretamente nos resultados. O objetivo do presente trabalho é avaliar diferentes condições de citotoxicidade de amostras de alumina (Al₂O₃) e hexaluminato de cálcio (CA₆) em função das variáveis: condições de lavagem das amostras, tamanho das amostras e tempo total de ensaio. Nos ensaios, as amostras foram posicionadas sobre a monocamada celular formada por células Vero. Para verificação da morfologia celular, as células cultivadas nas condições de citotoxicidade direta, a partir do contato com biomateriais lavados e não lavados de dimensões referenciadas por norma, foram observadas em 24 horas, 48 horas e 72 horas por meio de microscopia invertida com contraste de fase. Após isso, foram realizados ensaios de 24 horas com biomateriais de diferentes tamanhos. Os resultados indicam que tanto a alumina quanto a alumina lavada são viáveis e não citotóxicas. Já os hexaluminatos, não lavado e lavado, apresentaram citotoxicidade moderada.