Sistema de Submissão de Resumos, IX ENCONTRO DE INICIAÇÃO CIENTÍFICA - 2019

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Investigação de variantes do gene FOXL2 e sua relação com a insuficiência ovariana precoce.
Felipe Heurre De Carvalho Santos Vieira, Denise Maria Christofolini

Última alteração: 2019-10-01

Resumo


A insuficiência ovariana precoce (IOP) é definida como o declínio ou cessação da função ovariana, resultando em menopausa antes dos 40 anos de idade. Essa patologia acomete e 1:100 mulheres aos 40 anos. Pode ser causada por alterações cromossômicas, quimio/radioterapia, deficiências enzimáticas, doenças autoimunes ou variantes gênicas, porém, em 90% dos casos a causa é desconhecida. O FOXL2 é um gene presente no cromossomo 3 e começa a ser expresso nas células da granulosa do folículo primordial desempenhando um importante papel no recrutamento e manutenção do folículo, além de regular as vias de sinalização relacionadas ao TGFβ envolvidas na função ovariana. Assim, sugere-se que variantes nele presentes podem estar associadas com IOP. OBJETIVOS: Realizar o sequenciamento do gene FOXL2 em 50 mulheres acometidas pela IOP e comparar aos resultados de bancos de dados públicos, a fim de contribuir com dados para os estudos da etiologia da condição. MÉTODOS: Sequenciamento de Sanger, com a seguinte sequência de experimentos: PCR, gel de agarose, purificação do produto de PCR, reação de sequenciamento, purificação da reação de sequenciamento e eletroforese capilar. A região a ser sequenciada foi dividida em dois pares de primers devido seu tamanho. RESULTADOS: Descrevo aqui os resultados parciais, devido o projeto estar em andamento. As reações de PCR e de sequenciamento foram padronizadas e até o momento vinte e quatro amostras foram sequenciadas usando o par de primers 1. Nenhuma variante gênica foi encontrada. DISCUSSÃO: A padronização de reação está diretamente relacionada com os níveis de confiança do teste. Esta etapa, portanto, é importante para o sucesso do trabalho e para que fosse alcançada foram necessários desenhar novos primers diferentes dos disponíveis na literatura, que falharam em sua amplificação e realizar testes com reagentes como DMSO e enzimas. Além disso, foram padronizadas as quantidades de cada reagente, de forma a garantir que a reação fosse realizada em sua máxima eficiência. Após o término dos sequenciamentos, previsto para abril de 2020, esperamos encontrar variantes e as relacionar com a IOP. CONCLUSÃO: Com os resultados obtidos até o momento conclui-se que a etapa de padronização é fundamental para o êxito de qualquer análise, sendo uma etapa indispensável para qualquer projeto de pesquisa.